納米晶體(tǐ)标記細胞及活體(tǐ)成像參考實驗方¥<∏法

一(yī) 實驗材料

(1) 細胞及完全培養基

(2) 8 孔 BD Falcon Culture Sli¥Ωdes (cat. 354118)

(3) Reactive eFluor® Nanocrystals - InGaP Compos☆ε≠ition

(4) 0.2 μm 注射式濾器(qì)或其他(tā)無菌濾器(qì)

(5) 1CC胰島素注射器(qì)29 X 1/2-gauge（靜(jìπ₽ ng)脈注射用(yòng)）

(6) 裸鼠等動物(wù)模型

(7) 熒光(guāng)成像系統

二 實驗步驟

細胞傳代

(1) 從(cóng)75cm2的(de)培養瓶中傳代細胞至BD F•÷alcon Culture Slides，每孔密度為(wèi)2萬細胞（細♦♠胞密度随著(zhe)使用(yòng)培養闆不(bù)同而不(bù)同）。

(2) 37度，5%CO2培養箱中培養細胞24-48​♦ 小(xiǎo)時(shí)，使細胞鋪滿培養闆。

标記

(1) 使用(yòng)完全培養基稀釋納米晶體(÷©¥tǐ)，使最終OD值介于0.1至0.025之間(jiα¶ān)。由于不(bù)同細胞适用(yòng)納米晶體(tǐ)的(de)最佳♠λ∏≤濃度不(bù)同，建議(yì)滴定法預實驗确定最佳♣→濃度。

(2) 如(rú)果需要(yào)，使用(yòng)0.2微(wēi)米注射式£≤濾器(qì)過濾标記溶液。

(3) 取200微(wēi)升标記溶液代替培養闆中的(de)培養基。

(4) 培養過夜至24小(xiǎo)時(shí)。

(5) 除去(qù)标記液，使用(yòng)2毫升PBS洗滌三次。離(lí)心棄‌↓∑上(shàng)清。

(6) 使用(yòng)熒光(guāng)顯微(wēi)鏡或者共聚焦顯微(wēi)鏡檢測γ✘ε<熒光(guāng)标記情況，然後進行(xíng)下(xi≠$à)一(yī)步實驗。

活體(tǐ)成像

(1) 麻醉動物(wù)。

(2) 尾靜(jìng)脈注射納米晶體(tǐ)（↕ 主動靶向作(zuò)用(yòng)注射0.4nmol；被動靶向作(zuò)用(yòng)注射6n←>mol）。

(3) 成像系統鏡成像分(fēn)析。

三 參考文(wén)獻

1. Jaiswal, J.K., Simon, S.M. 2007. Optical moni≈±toring of single cells using qΩ☆uantum dots. Methods Mol Bi♣ελ‌ol. 374:93-104.

2. Gao, X., Chung, L.W., Nie, S. 2007. Quantum ‌•σdots for in vivo molecular andΩ↕ cellular imaging. Methods Mol Biol. 37•£→♥4:135-45.