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多(duō)因子(zǐ)檢測樣本的(de)收集和(hé)處♦₽理(lǐ)
正确的(de)樣本收集整理(lǐ)方法,是(shì)實驗成功至關重要(yào)的(de)步驟。目前↕₹→可(kě)以檢測樣本類型有(yǒu): 細胞上(shàng)清、血清、血漿。盡管其他(tā)$ 生(shēng)物(wù)學樣本沒有(yǒu)經過驗證,但(dàn)是(shì)理(lǐ)論上(♦α"♠shàng)也(yě)可(kě)以檢測,這(zhè)些(xiē)樣 β本包括: BAL,唾液,CSF,組織勻漿液和(hé)尿液。
下(xià)面我們針對(duì)幾種常見(jiδ₽∑àn)樣本的(de)收集、保存方法:
1、血清
全血室溫(20-25 °C)凝固20-30min;
室溫1,000 x g 10min;
收集上(shàng)清,或者選擇使用(yòng)血清分(fēn)離(lí)器(qì)γ§$©;
可(kě)選:如(rú)果樣本是(shì)高(gāo)血脂樣本,請(qǐng)先在2-8>₹♠℃10,000 x g 離(lí)心 10min,分(fēn)離(₩ ¥lí)出下(xià)層血清;
多(duō)因子(zǐ)檢測血清樣本要(yào)求新鮮;如(rú)☆±果不(bù)能(néng)在24h內(nèi≠↑)檢測,需要(yào)分(fēn)裝在-80 ℃保存,避÷∞&₩免反複凍融。
2、血漿
根據要(yào)求選擇檸檬酸或EDTA作(zuò)₩♣§↓為(wèi)抗凝劑。如(rú)果選擇肝素作(zuò)為(wèi)抗凝劑,建₽≥議(yì)每毫升血不(bù)超過10IU肝素(肝素φ&用(yòng)量過高(gāo),可(kě)能(néng)會(♥ε÷↔huì)導緻部分(fēn)檢測指标值偏高(gāo))。
收集抗凝全血後30min內(nèi),在4℃下(xià)→10,000 x g離(lí)心10min,分(☆∑δfēn)離(lí)收集血漿;
可(kě)選:如(rú)果樣本是(shì)高(gāo)血脂樣本,請(qǐ↔ £✘ng)先在2-8℃10,000 x g 離(lí)心 10miπ≈γn,分(fēn)離(lí)出下(xià)Ω×π層血漿;
多(duō)因子(zǐ)檢測血漿樣本要(yào)求新鮮;如(rú)∑ ♠果不(bù)能(néng)在24h內(nèi)檢測,需要(yào)分(fēn)裝在-8✔π™0 ℃保存,避免反複凍融。
3、細胞培養上(shàng)清
檢測分(fēn)泌性的(de)成份時(shí)↑↓¶,最好(hǎo)用(yòng)無菌管收集。離(lí)心20分(fēn)鐘(zh¶λōng)左右(2000-3000轉/分(fēn))。仔細收集上(shàng)清。
4、組織樣本
如(rú)果可(kě)以,請(qǐng)按照(zhào)參考文(wén)獻↓•>推薦的(de)方法。标本取完後液氮迅速冷(lěng)凍保±¶¥存備用(yòng)。标本融化(huà)後仍然保持2-8℃♥•™的(de)溫度。加入一(yī)定量的(de)含有(yǒu)蛋白(bái)酶抑 £制(zhì)劑的(de)緩沖液, 用(yòng)手工(gōng)或勻漿器>£↕φ(qì)将标本勻漿化(huà)。離(lí)心2₩ ₽0分(fēn)鐘(zhōng)左右(2000-3000轉/分(fēn))。仔細÷←♦收集上(shàng)清。
保存過程中如(rú)果有(yǒu)沉澱,檢測前樣本應該再₽←次離(lí)心去(qù)除沉澱,建議(yì)16,000 x g 離(lí)心5↑Ωmin。