原理(lǐ)：

碘化(huà)丙啶(Propidium ，簡稱PI)是(shì)一✔♥→$(yī)種雙鏈DNA的(de)熒光(guāng)染料。碘化(huà)丙啶←&和(hé)雙鏈DNA結合後可(kě)以産生(shēng)熒光(guāng)，并且熒光(≠±guāng)強度和(hé)雙鏈DNA的(de)含量成正比。細胞內(§Ω∑nèi)的(de)DNA被碘化(huà)丙啶染色後，可(k✘₽ě)以用(yòng)流式細胞儀對(duì)細胞進行(♠↑xíng)DNA含量測定，然後根據DNA含量£★ 的(de)分(fēn)布情況，可(kě)以進行(xíng)細胞周期和(hé)細胞凋亡分(fēn$σ÷&)析。

操作(zuò)步驟：

1、對(duì)于懸浮細胞，直接離(lí)心收集細胞，棄上(shàng)清，在4 ℃☆&β、1200rmp下(xià)用(yòng)$∑ 預冷(lěng)的(de)PBS洗細胞兩次；對(duì)于貼壁細胞，先用•​ε(yòng)不(bù)含EDTA的(de)0.25%的(de)胰酶消化(h↔σ↔uà)再離(lí)心收集細胞；

2、加入預冷(lěng)的(de)70%乙醇（PBS配制(zhì)） ©← ，于4℃固定過夜，或-20℃長(cháng)期固定；

3、離(lí)心收集細胞，以1 mL預冷(lě"™γng)的(de)PBS洗細胞一(yī)次，加入預冷(lěng)的(de) PBS重懸細胞，調整γ♥₽細胞濃度為(wèi)1.0×106，取出100 ul細胞懸液，加入R≠€Nase A酶，使RNase A終濃度為(wèi)1 mg/ml，混勻σ∞後37 ℃水(shuǐ)浴30 min；•γ₹

4、加入PI綜合染色液，使PI終濃度為(wèi)50 ug/mL，混勻，4℃冰箱避光(g×♦uāng)保存；

5、300目尼龍網過濾後，上(shàng)機(jī)檢測。

注意事(shì)項：

1、細胞濃度一(yī)定要(yào)≧1×106/ml，特别是(shì)陰性對(duì)照(zφ☆hào)管細胞量要(yào)大(dà)一(yī)些(•₽↑​xiē)，以便樣品電(diàn)壓調節；

2、必須保證被檢測樣品為(wèi)單細胞懸<•↕液；

3、如(rú)果樣品細胞為(wèi)培養的(de)貼壁細胞，→±≥∏将上(shàng)清轉入離(lí)心管（其中含有(yǒu)脫落的(de)₹ ​凋亡細胞），與不(bù)含EDTA的(de)胰酶消化(huà)的(de)細胞合并後離(lí)心收☆‍集細胞；

4、在細胞固定時(shí)一(yī)定要(yào)将細胞£‌∞吹開(kāi)，吹成單細胞懸液；

5、RNAse與PI綜合染液分(fēn)開(kāi)的(de)原因是(sh₩☆γ♣ì)RNAse的(de)作(zuò)用(yòng¥↑)最适溫度是(shì)37℃，而不(bù)是(shì)4℃，所以與教↑€材有(yǒu)所不(bù)同；

6、PI綜合染液不(bù)能(néng)用(yòng)≥‌∑蒸餾水(shuǐ)配，否則細胞全部溶解，造成結果不(bù)可(kě)靠；

7、4℃過夜一(yī)般隔天就(jiù)進行(xíng)檢測，如(rú)果想推遲÷€¥₽幾天測，那(nà)就(jiù)保存在-20℃，有(yǒu)資料顯示-20℃可(kě)以至少(shǎ≥σo)保存一(yī)個(gè)月(yuè)；

8、70%~75%的(de)酒精都(dōu)可(kě)以用(yòng)于PI單£↔染固定。