1、材料

L-929 細胞系（ATCC Cat# CCL-1）

培養基：RPMI1640+10%FBS。

檢測培養基：RPMI1640+2%FBS。

96孔闆（平底）（Costar Cat.No.35∏↔​95）

放(fàng)線菌素D，500ug/ml 等分(fēn)-80度φ→δ​凍存（避光(guāng)）。

MTT溶液：（Sigma Cat. No. M5655）5mg/ml 儲液（PBS稀釋），室溫避"ε€光(guāng)保存。

MTT裂解液：20%SDS或50%DMF。

2、儀器(qì)

吸管和(hé)移液器(qì)

恒濕培養箱

96孔微(wēi)孔檢測分(fēn)光(guāng)光(guān÷"÷g)度計(jì)

3、持續時(shí)間(jiān)

孵育時(shí)間(jiān)48小(xiǎo)時(shí)（見(jiàn)速查表€¶）

測定樣品準備時(shí)間(jiān)1小(xiǎo)時(shí)

4、實驗步驟

(1) 使用(yòng)檢測培養基制(zhì)備L92∞ φ♥9懸液，調整細胞濃度為(wèi)3.5×₹>£105/ml，每孔加100ul細胞懸液。37©∏>→度 5%CO2 恒濕培養箱培養過夜。

(2) 另一(yī)塊稀釋闆中每孔加50ul檢測•>培養基。

(3) 使用(yòng)兩倍的(de)連續稀釋液從(cóng)第3排到(dào)第12排依₽★✔←次稀釋功能(néng)級别的(de)抗細胞因子(zǐ)抗體(tǐ)（見(jiàn)速查表标準範圍 ®×），留1,2排不(bù)加。

(4) 2排到(dào)12排每孔加50ul重組細胞因子(zǐ)和(h≠∞"é)樣品（濃度見(jiàn)速查表，第二排是(shì ±α₹)細胞因子(zǐ)和(hé)指示細胞組），1排是(shì)隻有(yǒu)§™β​細胞的(de)對(duì)照(zhào)組。

(5) 37度 5%CO2 恒濕培養箱培養2小(xiǎo)時( <↕shí)。

(6) 将50ul的(de)抗原抗體(tǐ)混合液加到(dào)™>包含細胞的(de)對(duì)應孔中。

(7) 用(yòng)檢測培養基稀釋放(fàng)射菌素D儲液為(wèi♦≥)4ug/ml的(de)工(gōng)作(zuò)液，每孔加50ul工(↔™gōng)作(zuò)液。

(8) 37度 5%CO2 恒濕培養箱培養24₽룕小(xiǎo)時(shí)。

(9) 每孔加10ul MTT溶液（5mg/ml），孵育4小(xiǎo)時(shí)。

(10)每孔加50ul MTT 裂解液，孵育÷  →過夜。

(11)570-650nm 讀(dú)闆÷↔。

(12)繪制(zhì)标準曲線分(fēn)析數('βshù)據。