1、材料

指示細胞系：見(jiàn)速查表。

培養基：RPMI1640+10%FBS。

檢測培養基：RPMI1640+2%FBS。

96孔闆（平底）（Costar Cat.No‌¥.3595）

MTT溶液：（Sigma Cat. No. M↑ ∞5655）5mg/ml 儲液（PBS稀釋），室溫避光(guāng)保存。

MTT裂解液：20%SDS或50%DMF。

2、儀器(qì)

吸管和(hé)移液器(qì)

恒濕培養箱

96孔微(wēi)孔檢測分(fēn)光(guāng)光(g∏∏uāng)度計(jì)

3、實驗持續時(shí)間(jiān)

孵育時(shí)間(jiān)24-48小(xiǎo)時(shí)

測定樣品準備時(shí)間(jiān)1小'>ε(xiǎo)時(shí)

4、實驗方案

（1）向96孔闆每孔中加50ul檢測培養基。

（2）使用(yòng)兩倍的(de)連續稀釋液從(cóng)第3排到(dào)第12排依次稀釋♦&功能(néng)級别的(de)抗細胞因子(zǐ)抗體↑ (tǐ)，留1和(hé)2排不(bù)加，作(zuò)為(>♣wèi)對(duì)照(zhào)。

（3）2排到(dào)12排每孔加50ul重組細胞Ω∞±因子(zǐ)和(hé)樣品（濃度見(jiàn)速查表，第二排是(shì)細胞因子(>↑zǐ)和(hé)指示細胞組），1排是(shì)隻有(yǒu)細胞的(de<≈')對(duì)照(zhào)組。

（4）37度 5%CO2 恒濕培養箱培養2小(xiǎo)¥¶時(shí)。

（5）1640培養基洗指示細胞三次，檢測培養基重懸調整細胞濃度到(dào)2-3.5×105↕®φ/ml（見(jiàn)速查表）。

（6）每孔加100ul細胞懸液。

（7）37度 5%CO2 恒濕培養箱培養24-48小(xiǎo)時(shí)。

（8）每孔加10ul MTT溶液（5mg/‍÷ml），孵育4小(xiǎo)時(shí)。

（9）每孔加50ul MTT 裂解液，孵育過夜。

（10）570-650nm 讀(dú)闆。

（11）繪制(zhì)标準曲線分(fēn)析數(shù)據。