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Taitool神經元逆标方案
1. AAV2Retro 非跨突觸逆标
血清型2Retro是(shì)在2型血清型的(de)基礎上(shàng)突變篩選得(de)到(d ∞¥↑ào)的(de),最主要(yào)的(de)是(shì)在原來(l&βái)外(wài)殼上(shàng)的(≤£de)肝素結合位點中間(jiān)添加了(le¥™¥≥)大(dà)約7個(gè)氨基酸,它比AAV2型的(de)病毒逆λ∞€₽标的(de)能(néng)力提高(gāo)了(le)100多(duō)倍。
優點:在大(dà)部分(fēn)環路(lù)逆标♠↑效率高(gāo),能(néng)夠在上(shà≠¶φφng)遊直接表達目的(de)基因。
缺點:不(bù)過有(yǒu)些(xiē)環路(lù)它的(de)标記能(né ☆∑ng)力有(yǒu)限,在一(yī)些(x±÷iē)上(shàng)遊表達的(de)不(®♥"bù)均勻,跟CAV一(yī)樣它對(duì)上(shà©↑ng)遊的(de)感染不(bù)是(shì)通(tō↓€ Ωng)過突觸傳遞實現(xiàn)的(de),而是(shì)對(duì)上(shàng)'φ✔遊細胞的(de)直接感染,可(kě)能(néng)會(huì)造成一(yī)些(xiē)非特異的≈•(de)感染。
實驗方案1:
在下(xià)遊注射AAV2Retro-CrΩ♦e(滴度1E+13VG/mL,體(tǐ)積20~50nl↔&γ左右),上(shàng)遊注射DIO-GOI病毒(一(yī)般用(yòng)血清型9型,"₽₩滴度3E+12VG/mL,體(tǐ)積200→<nl左右)
實驗方案2:
在下(xià)遊注射AAV2Retro-GOI(¶ ♥滴度1E+13VG/mL,體(tǐ)積20~50nl左右≤♥★),在上(shàng)遊直接觀察;
實驗方案3:
在下(xià)遊注射AAV2Retro-DI± O-GOI(滴度1E+13VG/mL,體(tǐ)積20~50nl左右),上(s↑®↓•hàng)遊注射Cre病毒(一(yī)般用(yα&₽≠òng)血清型9型,滴度3E+12VG/mL,體(tǐ)積200nl左右)或者是(shì)上✔§Ωγ(shàng)遊有(yǒu)Cre表達的(de)轉基因鼠。
2. AAV2Retro Pluπ$♦♦s非跨突觸逆标(泰兒(ér)圖獨有(yǒu))
血清型2Retro Plus是(shì)在★×♥ 2Retro型血清型的(de)基礎上(shàng)增加了(le)多(duō)個(gè)點突變,提∞↕₩π高(gāo)了(le)病毒在運輸過程中的(de)穩定性。
優點:逆标的(de)效率比2Retro更高(gāo),表達≠♥更均勻。
缺點:跟CAV一(yī)樣它對(duì)上(shàng)遊的(de)感染不(bù)是<λ(shì)通(tōng)過突觸傳遞實現(xiàn)的(de)™≤,而是(shì)對(duì)上(shàng)遊細胞的(de)直接感染,可(kě)能(nén↑™≤g)會(huì)造成一(yī)些(xiē)非特異> 的(de)感染。
實驗方案1:
在下(xià)遊注射AAV2Retro Plus-Cre(滴度1E+1¥ 3VG/mL,體(tǐ)積20~50nl左右),上(shàng)遊注射DIO-GOI¶☆病毒(一(yī)般用(yòng)血清型9型,$€®滴度3E+12VG/mL,體(tǐ)積200nl左右)
實驗方案2:
在下(xià)遊注射AAV2Retro Plus -GOI(滴度1E+13VG/mL,體(tǐ)®®↑☆積20~50nl左右),在上(shàng)遊直接觀察;
實驗方案3:
在下(xià)遊注射AAV2Retro Plus -DIO-GOI(滴度1E+1ε↕3VG/mL,體(tǐ)積20~50nl左♠¶ ♠右),上(shàng)遊注射Cre病毒(一(yī)般用(yòng)血清型9型,滴→γφ度3E+12VG/mL,體(tǐ)積200•£nl左右)或者是(shì)上(shàng)≥遊有(yǒu)Cre表達的(de)轉基因鼠。
3. CAV非跨突觸逆标
Canine-Adeno-Virus能(≠☆néng)夠從(cóng)纖維和(hé)胞體(t↕αǐ)進入神經元細胞,它對(duì)神經元細胞的(de)親嗜性遠(yuǎn)高(♥£gāo)與膠質細胞。當CAV從(cóng)纖維§¥或末梢進入神經元細胞之後,有(yǒu)一(y×£✔ī)部分(fēn)病毒會(huì)被細胞轉運到(dà'π÷∞o)胞體(tǐ)中,繼而表達CAV載體(tǐ)所攜帶的(de)外(wài)源基因。
優點:CAV病毒對(duì)細胞基本沒有(yǒu)毒性, ≠>↓顆粒大(dà),擴散小(xiǎo),感染區(qū)域可(kě)控。©∑适合做(zuò)稀釋标記。
缺點:目前用(yòng)的(de)重組CAV病毒在上(shàng)遊的(de)表達能(néng)力較β"弱,其次在有(yǒu)些(xiē)環路(lù)它的(de)标記能(néng)力有(yǒu)限,還✘(hái)有(yǒu)它的(de)對(duì)上(shàng)遊的(de)感染✘'φ不(bù)是(shì)通(tōng)過突觸傳遞實≤Ω¥☆現(xiàn)的(de),而是(shì)對(duì)上(shàng)遊細胞的(de)₩÷€β直接感染,可(kě)能(néng)會(huì)造成一(yī)些(xiē)非特異的(de)感染±↕。
實驗方案:
在下(xià)遊注射CAV-Cre(滴度1E+12VP/mL,體(tǐ)積200nl左右≈♣),上(shàng)遊注射DIO-GOI病毒(一&Ω(yī)般用(yòng)血清型9型,滴度3E+12VG/mL,★↓體(tǐ)積200nl左右)
4. WGA-Cre表達載體(tǐ)
wheat-germ agglutinin 小(x★↕♠iǎo)麥凝集素蛋白(bái),在神經元中表達後有(yǒu)跨↑↓♥≥突觸的(de)能(néng)力。偶聯Cre蛋白(bái)的(de)WGA,會¥"&(huì)攜帶Cre同時(shí)跨突觸從(cóng)而标記上(shàng)下(xià)遊≥±神經元。
優點:可(kě)實現(xiàn)細胞特異上(shàng)下(xiàσ)遊标記(比如(rú)用(yòng)fDIO-WGA-Cre)。
缺點:在一(yī)些(xiē)環路(lù)中效果不(bù)佳,上(shàng♦γγ)下(xià)遊均有(yǒu)可(kě)能(néng)标記。
實驗方案:
在下(xià)遊注射WGA-Cre(滴度3E+12VGδγ/mL,體(tǐ)積200nl左右),上(shàng)遊注射DIO-GOI病毒(一( ₽yī)般用(yòng)血清型9型,滴度3E+12VG/mL,體(tǐ)≤Ω↔積200nl左右)