方案A：組織培養細胞的(de)制(zhì)備。

方案B：淋巴組織細胞制(zhì)備。

方案C：非淋巴組織細胞制(zhì)備。

方案D：全血PBMC的(de)分(fēn)離(l ε→↔í)。

小(xiǎo)貼士

1、流式細胞儀檢測需要(yào)将細胞制(zhì)備成單細胞懸液。

2、避免細胞成團，以免堵塞流式細胞儀。

3、實體(tǐ)組織制(zhì)備單細胞懸液需要(yào)物(wù)理(lǐ)方法分β©λ(fēn)離(lí)或酶消化(huà)法進行(xínα​σφg)，具體(tǐ)組織的(de)方法，依照™↓(zhào)經驗來(lái)進行(xíng)。

方案A: 組織培養細胞的(de)制(zhì)備

實驗材料：

Accutase™ 酶細胞分(fēn)離(lí)培 ↔α養基 (eBioscience Cat. No. 00-4555¥↔)

eBioscience® 流式染色緩沖液 (eBioscience Cλ>™at. No. 00-4222)

15ml或50ml的(de)離(lí)心管。 π​

實驗流程：

1、如(rú)果是(shì)懸浮細胞，則小(xiǎo)心将細胞移入離(líβσ™©)心管中，進行(xíng)計(jì)數(shù)和(hé)活力分(fēn)析。進行®★(xíng)步驟3.

2、如(rú)果是(shì)貼壁細胞，建議(yì)使用(yòng)Accuta¶‍se™ 酶細胞分(fēn)離(lí)培養基 €ε×∞(eBioscience Cat. No. 00-4555)是(shì)細胞團塊↔>分(fēn)離(lí)，制(zhì)備成單細胞懸液後置于離(lí)心管中計(jì)數('> ≈shù)和(hé)活力分(fēn)析。（注意₹ε₩♣:accutase 可(kě)能(néng)會(huì)改變某些(xiē)細胞表位，應該預實 →驗觀察避免其幹擾檢測）

3、300g 離(lí)心5min。棄去(π™♠qù)上(shàng)清，應用(yòng)适量的(de)流式染色緩沖液重懸細胞，調整細胞濃度為(w&→✘<èi)2×107/ml。

方案B：淋巴組織細胞制(zhì)備。

實驗材料：

60×15mm 的(de)組織培養皿

5ml 注射器(qì)

細胞過濾器(qì)（尼龍網過濾）

eBioscience® 流式染色緩沖液 (eBiosci↓>ence Cat. No. 00-4222) 

15ml或50ml的(de)離(lí)心管。

實驗方案：

1、獲取組織（脾髒，淋巴結或胸腺）加入5~10ml eBioscience® 流式₹✘™♠染色緩沖液 (eBioscience Caφ♣↓t. No. 00-4222)，使用(yòng)5ml注射器(qì)注射心★Ω♠¥研磨組織（或采用(yòng)兩片載玻片研←>™磨亦可(kě)）。 

2、收集磨碎的(de)細胞懸液，過濾至離(lí)心管中計(jì)數(shù)和(hé)活力分(★©♠>fēn)析。 

3、300g 離(lí)心5min。棄去(qù)上(shàng)清，應用 ©(yòng)适量的(de)流式染色緩沖液重懸細胞，調整細胞濃度為∏Ω(wèi)2×107/ml。

方案C：非淋巴組織細胞制(zhì)備。

剪刀(dāo)和(hé)手術(shù)刀(dāo)片

剪刀(dāo)和(hé)手術(shù)刀(dāo)片 

PBS 

60×15mm 的(de)組織培養皿  <•;   

5ml 注射器(qì) 

細胞過濾器(qì)（尼龍網過濾） 

eBioscience® 流式染色緩沖液 (eBiosci¥λence Cat. No. 00-4222) 

15ml或50ml的(de)離(lí)心管。

實驗流程:

1、獲取組織剪碎或切碎組織為(wèi)2~4mm碎塊，用(yòng) φPBS稀釋适量的(de)酶進行(xíng)消化✔±≤(huà)（溫度，方法依照(zhào)酶的(de)說(shuō)≠↑£≠明(míng)書(shū)）。 

2、小(xiǎo)心分(fēn)離(lí)細胞團塊，過濾除去(qù)死細胞和(hé)碎片。&∑§σ↔nbsp;

3、300g 離(lí)心5min，棄去(qù)上(shàng)清。加PBS 5ml÷π 300g 離(lí)心5min，棄去(qù)上(shàng)清，重複一(yīε₩×)次。計(jì)數(shù)和(hé)活力分(fēn)析。 

4、300g 離(lí)心5min，棄去(qù)上(shàng)清，應用(yγ↔òng)适量的(de)流式染色緩沖液重懸細胞，調整細胞濃度為(wèi)2×107/ml。♥®✔α

方案D：全血PBMC的(de)分(fēn)離(lí)。

實驗材料： 

PBS 

Ficoll® 淋巴細胞分(fēn)離(lí)液 

eBioscience® 流式染色緩沖液 (eBioscience Cat. No. 00-✔×<©4222) 

15ml或50ml的(de)離(lí)心管。

實驗流程： 

1、以PBS 1:1稀釋血樣。将血樣輕輕加到(dào)2ml →↓αFicoll® 淋巴細胞分(fēn)離(lí)液或其γ&€→他(tā)品牌亦可(kě)。 δ÷

2、1000g離(lí)心20min,小(∏<xiǎo)心吸取分(fēn)離(lí)液和(hé)PBS之間(jiān)的(de)霧狀細胞，即為™¥σ↑(wèi)PBMC。至新的(de)離(lí)心管中。 

3、4度，300g 離(lí)心5min,棄上(shàng)清。應用(yòng)适量的(€₹£de)流式染色緩沖液重懸細胞，計(jì)數(shù)和(hé)細‌£  胞活力，調整細胞濃度為(wèi)2×107✘♥/ml。