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定量PCR專用(yòng)反轉錄試劑PrimeScript™ RT reage>σnt Kit with gDNA Eraser (Perfe♠→₽&ct Real Time)

貨号：RR047A發布時(shí)間(jiān)：2023-08-16 15:16分(fēn)享：

詳情

産品相(xiàng)關下(xià)載

■ 制(zhì)品內(nèi)容 (Code No.: RR0 47A: 20 μl反應×100次量)

1. gDNA Eraser	100 μl
2. 5X gDNA Eraser Bu♣§↑ffer^*1	200 μl
3. PrimeScript RT Enzyme Mix I^*2	100 μl
4. 5X PrimeScript Buffer ∑×$ 2(for Real Time)^*3	400 μl
5. RT Primer Mix^*4	400 μl
6. RNase Free dH2O	1 ml×2
7. EASY Dilution (for Re×₩✔al Time PCR)^*5	1 ml

1 5X gDNA Eraser Buffer在反轉∏‌₽錄反應前使用(yòng)，請(qǐng)務必進行(xín§φ'g)基因組DNA的(de)除去(qù)反應。 2 含有(yǒu)RNase Inhibitor。 3 含有(yǒu)dNTP Mixture。 4 含有(yǒu)Oligo dT Primer和(hé)Random 6 mers。★¶₽β *5 制(zhì)作(zuò)标準曲線時(shí)梯度稀釋cDNA或RNA标準品的©'(de)稀釋液。模闆cDNA或RNA如(rú)果用(yòng ♥)水(shuǐ)或TE Buffer稀釋¶β'時(shí)，由于受Microtube吸附作(zuò)用(yòng)等的(de)影(yǐ$"ng)響，往往不(bù)能(néng)準确地(dì)進行(xíng)稀釋，導緻實驗®∞λφ結果精度降低(dī)。使用(yòng)本制(zhì)品時(shí)，即使稀釋至¥π↕$低(dī)濃度也(yě)能(néng)夠進行(xíng)準确地(dì)稀 ÷₹釋，容易在寬廣範圍內(nèi)獲得(de)準确定量的§$(de)标準曲線。本制(zhì)品不(bù)影(yǐn $g)響反轉錄和(hé)PCR反應，用(yòng)其稀釋後的(de)樣品可(k↔¥₹✘ě)直接使用(yòng)。EASY Dilutλ £ion (for Real Time PCR) (Cod♠¶e No. 9160/9160Q) 也(yě)可(kě)以單獨購(♦$gòu)買。注意：EASY Dilution (for Real Time PCR) 請(φ☆ qǐng)與本公司Real Time PCR試劑組合使用(yòng)，對(duì§•γ)于其他(tā)公司的(de)同類制(zhì)品的(de)适用(y☆ •òng)性本公司尚未進行(xíng)确認。

■ 制(zhì)品說(shuō)明(míng)

為(wèi)了(le)準确地(dì)進行(xíng)基因表達量分(★∞σγfēn)析，必須滿足隻有(yǒu)cDNA作(zuò)為(w• ‌Ωèi)模闆檢出的(de)先決條件(jiàn)，但(dàn)Total RNA中常 Ω常混有(yǒu)基因組DNA，并可(kě)以直接作(zuò)為(wèi)PCR™☆δ反應的(de)模闆進行(xíng)擴增，因此‍♥€>會(huì)造成解析結果不(bù)準确。為(wèi)了(le)避免這(zhè)種情₹☆δ©況發生(shēng)，通(tōng)常将檢測用(yòng)引物(wù>₽♦φ)設計(jì)在內(nèi)含子(zǐ)前後的(de)外(wài)顯子(zǐ)上(>'÷shàng)，使基因組DNA得(de)不(bù)到(dào≠↕)擴增。但(dàn)是(shì)，此方法不(bù)适∑>¶合具有(yǒu)單個(gè)外(wài)顯子(zǐ)→∑的(de)基因或兩個(gè)外(wài)顯子(zǐ)之間(jiān)→™λ‌所跨的(de)內(nèi)含子(zǐ)過小(xiǎo)的(de)基因， ×同時(shí)當基因組上(shàng)有(yǒu)僞基因存在時(shí)、或設計₽±α<(jì)引物(wù)對(duì)基因組有(yǒu)非αφ£≤特異性擴增時(shí)、以及基因信息沒被¥β完全解析的(de)生(shēng)物(wù)種等也(yě)同樣不(bù)适合于本方法。在這(z±εhè)種情況下(xià)，我們常常需要(yào)對(duì)Total RNA樣品進行¥<✔(xíng)DNase I處理(lǐ)，以除去(qù)殘存的(de)基因組DNA。而DNase•λ I處理(lǐ)通(tōng)常要(yào)進行(xíng)複雜(zá₽♦)的(de)純化(huà)操作(zuò)，同時(shí)δ↑β會(huì)造成RNA的(de)降解和(hé)損失。
PrimeScript RT reagent Kit wit↓✔h gDNA Eraser是(shì)可(kě)以除去(qù)基因組DNA進行®™(xíng)Real Time RT-PCR反應的(de)專用(yòng)反轉錄πφ♣φ試劑。Kit中使用(yòng)了(le)具有(yǒu)較強DNA分 ≠₹(fēn)解活性的(de)gDNA Eraser，通(tōng)過42℃，γ>• 2 min即可(kě)除去(qù)基因組DNA。同時(shí)由于反轉錄試≤α≥←劑中含有(yǒu)抑制(zhì)DNA分(fγ'ēn)解酶活性的(de)組分(fēn)，經過gDNA Eraser處理(lǐ)後的∞↕(de)樣品可(kě)以直接進行(xíng)15 min的(de)反轉錄反應合成cε← ♦DNA，因此，20 min內(nèi)即可(kě)迅速完成從(cóng)基因組∑≥DNA去(qù)除到(dào)cDNA合成的(de)全過程。
使用(yòng)本制(zhì)品合成的(de)cDNA适用(§yòng)于嵌合法和(hé)探針法qPCR分(fēn)析，可(kě)以根據實驗目的&≠↔(de)，選擇與TB Green^® Premix Ex Taq^™ II (Tli RNaseH Plus) (Co↑ εγde No. RR820Q/A/B)^*、TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420A/B)^*、Probe qPCR Mix (Code N ≥ ₹o. RR391S/A/B) 組合使用(yòng)。

*：Takara嵌合法Real Time P€φCR（qPCR）産品的(de)名稱從(có÷βng)2017年(nián)12月(yuè)下(xià)旬開(kāi)始，将逐←€¶€步變更為(wèi)「TB Green系列」。産品Code、性能(n<©πéng)和(hé)原有(yǒu)産品相(xiàng)比沒有(yǒu)變化(huà)，請(↑÷qǐng)繼續放(fàng)心使用(yòng)。
産品名稱将随新lot的(de)産品逐步變更，産品網頁或操作≠ ‍§(zuò)說(shuō)明(míng)書(shū)可(kě)能(néng)會(huì)先→£♣♦于産品标簽變更，望知(zhī)悉！

■ 保存

-20℃。

■ 試劑盒特長(cháng)

1. 含有(yǒu)去(qù)除基因組Dφ ¥↓NA的(de)gDNA Eraser，隻需2 min即可(kě)除去(qù)基因★☆≈組DNA。
2. 隻需15 min即可(kě)高(gāo)效合成Real Time P♥∑CR反應用(yòng)模闆cDNA，是(shì)進行(xíng)2 Step Real Tiγ¥me RT-PCR反應的(de)理(lǐ)想試劑。
3. 反轉錄引物(wù)使用(yòng)了(le)Random 6 mβλ€ers和(hé)Oligo dT Primer混合的(de)RT Pri≈✘₹÷mer Mix，可(kě)以均勻合成樣品中的(de)各種cDNA。
4. 本制(zhì)品提供了(le)TB Green qPCR分(f λ‍ ēn)析法和(hé)探針qPCR分(fēn)析法各自(zì)适合的(de)反應體σ‍¥↓(tǐ)系，可(kě)以根據分(fēn)析方法選擇體(tǐ)系。
TB Green qPCR分(fēn)析法和(hé)探針qPCR₩₩™分(fēn)析法區(qū)别如(rú)下(xià)：
(1) 反轉錄反應中RT Primer Mix的(de)用(yòng)量。
(2) 反轉錄反應中總RNA的(de)用(yòng)量。
5. Real Time RT PCR定量需要(yào)建立≥™₩标準曲線，建立标準曲線的(de)條件(jγ¶iàn)就(jiù)是(shì)需要(y>©ào)将總RNA和(hé)反轉錄cDNA稀釋到(dào)較低ε∏<"(dī)的(de)濃度。如(rú)果用(yòng)水(shu &ǐ)或TE Buffer稀釋時(shí)，由☆©于模闆濃度低(dī)不(bù)穩定，因而會(huì)縮小(xiǎo)曲線範εδ圍，結果準确度降低(dī)。本制(zhì)品中附加了(le)标準曲線制(zh§€ì)作(zuò)用(yòng)稀釋液EASY Dilution (for Rea✔ ∞ l Time PCR) ，将Total RNA或cDNA稀釋至低(dī)濃度時(π→shí)也(yě)能(néng)夠進行(xíng)準确稀釋，容易©→在寬廣範圍內(nèi)獲得(de)準确定量的(de)标準曲線。

■ 注意事(shì)項

1．使用(yòng)本制(zhì)品合成的(de)cDNA與TB Green≈ ≤關聯制(zhì)品組合使用(yòng)時(©<shí)，建議(yì)使用(yòng)：
TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Code No.RR820Q/ ♠<A/B)
TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420Q/A/B®≠♥)
以上(shàng)制(zhì)品與本制(zhì)品組合使用(yòn→&♣≠g)，可(kě)以得(de)到(dào)可(kě)信Ω≥度高(gāo)的(de)結果。
本制(zhì)品與TB Green Fast →∏qPCR Mix (Code No. RR43©↑<0S/A/B) 組合使用(yòng)時(¶£shí)，有(yǒu)時(shí)反應性能≥σπ(néng)不(bù)好(hǎo)，不(bù)推薦使用β €(yòng)。
2. 當同時(shí)需要(yào)進行(xíng)數(shù)次反應時(< ∞shí)，應先配制(zhì)各種試劑的(∞α♦de)混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、酶等)，然後再分(fēn)裝到(dào)每個(gè↔♦)反應管中。這(zhè)樣可(kě)使所♣ ∞取的(de)試劑體(tǐ)積更準确，減少(shǎo)試±♣₩€劑損失，避免重複分(fēn)取同一(yī)試劑。同時(shí)也(yě)可( Ωkě)以減少(shǎo)實驗操作(zuò)或實驗之間(jiān)産生(shēng)的(d&↔e)誤差。
3. gDNA Eraser和(hé)PrimeScript RT Enzyme Mix I&¥ 在使用(yòng)前要(yào)小(xiǎo)心地(dì)離(lí)心收集到£™∞(dào)反應管底部。由于酶保存液中含有(™£✔yǒu)50%的(de)甘油，粘度高(gāo)，分(fē€>n)取時(shí)應慢(màn)慢(màn)吸取。同δ∏時(shí)，要(yào)使用(yòng)精确、量程适合的(de)移液槍，并♠∑且不(bù)要(yào)使Tip插入液面過深，否則會(huì)因Tip壁粘著(zhe§±)造成損失，而使酶量不(bù)足。
4. 5X gDNA Eraser Bu™ε♣ffer和(hé)5X PrimeScript Buffer 2（for Real Tim'✔σe）在使用(yòng)前需Vortex振蕩混勻，輕輕離(lí)心後使用(yòng)。
5. 分(fēn)裝試劑時(shí)務必使用(yòng)新的(de)槍頭 (Tip)，以防止樣 ¥ε£品間(jiān)污染。

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