• 必須能(néng)夠被流式細胞儀上(shàng)所配備的(de)激光(guāng)器(qì₹')所激發

• 激發的(de)光(guāng)譜必須在儀器(qì)上(shàng)濾光€↕(guāng)片能(néng)夠接受的(de)合适範圍內(nèi)

• 熒光(guāng)染料光(guāng)譜的(de)重疊應€'₹β當盡量減少(shǎo)

• 高(gāo)表達量的(de)抗原幾乎可(kě)以用(yòng)任何熒光∏≤(guāng)染料标記抗體(tǐ)檢測，而較低(dī)表達的(deα→φ♦)抗原則需要(yào)用(yòng)較高( σgāo)S/N比值的(de)熒光(guāng)染料标記的(de)抗體(tǐ)檢測。常用(yòn★$₩•g)熒光(guāng)的(de)強弱如(rú)下(xià)：PE>AP∑♣C>PE-Cy7>Percy-Cy5.5>FITC>A÷←λ®PC-Cy7。

• 檢測自(zì)發熒光(guāng)水(shuǐ)平高(gāo)的(de)細胞€β↕時(shí)，使用(yòng)發射光(guāng)波長(cháng)較長(cháng)的(d¶∏★e)熒光(guāng)染料（如(rú)APC），可(kě)以得(→↔de)到(dào)較好(hǎo)的(de)S/N比★₩¶值。

根據儀器(qì)選用(yòng)熒光(guāng)染料：

1、每個(gè)人(rén)通(tōng)道(dào)隻能(néng)選擇一(yī)種熒光(gu×∞→Ωāng)染料；

2、各個(gè)通(tōng)道(dào)之間(jiān)的σγ(de)熒光(guāng)染料可(kě)以随意搭配，搭配的(de)熒光(gu↕αāng)染料之間(jiān)發射光(guāng)譜重疊盡量小(xiǎ >o)。

不(bù)同的(de)流式細胞儀可(kě)選的(de)熒光(guāng)染料 ®↑♠

做(zuò)多(duō)色實驗，使用(yòng)熒光(guāng)染料&©♥♦多(duō)，可(kě)以登陸eBioscience網♠≤$Ω站(zhàn)http://www.ebiε§γ÷oscience.com/resources★₹★/fluorplan-spectra-viewer.htm，借助FluorPlanSpectra₽↕♣ Viewer 進行(xíng)熒染料光(gu↔ €āng)選擇，減少(shǎo)熒光(guāng)疊加現(xiàn)象，便于後期數(shù)據₽Ω'₹分(fēn)析。

熒光(guāng)補償

• 熒光(guāng)溢漏：當一(yī)個(gè)熒光(guāng)經過激光(guāng)之後，激發發射光(g≥¶uāng)及發射波長(cháng)，而各個(gè)熒光(guān'♠>♦g)發射光(guāng)之間(jiān)♣>有(yǒu)一(yī)定的(de)重疊，會(huì)溢漏一(yī)部$‌α分(fēn)的(de)熒光(guāng)到(dào)其他(tā'≥¶')鄰近(jìn)的(de)通(tōng)道(dào)裡(lǐ↓©)。

• 熒光(guāng)補償：如(rú)果我們要(yào)檢測一(yī ∏✔≥)個(gè)通(tōng)道(dào)的(de)信号的(de)時(sh≠βí)候必須要(yào)将其他(tā)通(tōng)Ω↑×道(dào)溢漏過來(lái)的(de)光(guāng)減掉，才能(néng)檢測到(dσ™✘ào)目标通(tōng)道(dào)的(de)真正信号，•↑≠₹而這(zhè)個(gè)糾正熒光(guāng∏₽)溢漏的(de)過程就(jiù)是(shì)我們所說(shuō)的(de)熒光(guāng≥®™)補償。

• 熒光(guāng)補償和(hé)熒光(guāng)染料本身(shēn)的(de)特質有(yǒuεδ÷★)關，和(hé)PMT有(yǒu)關。為(wèi ‌±★)了(le)減少(shǎo)溢漏值，可(kě)以增加主通(tōng)‍≤道(dào)的(de)PMT電(diàn)壓，或者減少(shǎo)被溢漏<↕→通(tōng)道(dào)的(de)PMT電(×÷↓diàn)壓。