Arcrain站(zhàn)友(yǒu)是(shì)流式中文(wén)網資深的(de)∑♣熱(rè)心站(zhàn)友(yǒu)，往往不(✘€bù)言則已，言必驚人(rén)。前兩天，在回答✘'÷ (dá)站(zhàn)友(yǒu)問(wèn)題時(shí)，十分(fēn)詳細地(dì)講解​¥了(le)流式分(fēn)選儀的(de)性能(néng)指标，并→↕₽穿插了(le)不(bù)少(shǎo)分(fēn)∏₹↕"選的(de)實用(yòng)技(jì)巧，不(bù)收藏真是(shì)可(kě)惜了(le)。

分(fēn)選效率和(hé)分(fēn)選純度是(shì)選擇流式分(fēn)選儀很(₹↓hěn)重要(yào)的(de)性能(né®≥✔ng)指标。

分(fēn)選純度很(hěn)簡單，是(shì)你(nǐ)最後得(de)到(dào)的<←✔♥(de)細胞當中，有(yǒu)百分(fēn)之多(duō)少(shǎo)是(shì)目标細胞。分(' fēn)選完了(le)之後，立即再用(yòng)分(f​®ēn)選得(de)到(dào)的(de)細胞上(shàng)樣一(yī)檢測就(jiù)©∞γ可(kě)以知(zhī)道(dào)了(le)。

分(fēn)選效率：一(yī)般所說(shuō)的(de)分(fēn)✘♣選效率應該是(shì)指分(fēn)選門(mφ≤¶én)內(nèi)有(yǒu)百分(fēn)之多(duō)少(shǎo)的(de)細胞被€≈•儀器(qì)分(fēn)選出來(lái)。這(zhè)個(gè)與你(nǐ)設​β定的(de)分(fēn)選模式、跑樣速度、儀器(qì)液滴震蕩頻✘✘ δ(pín)率、目标細胞的(de)百分(fēn)比、電(diàn)子(zǐ)系統性能(néng)∞ 等都(dōu)有(yǒu)關系。

分(fēn)選模式影(yǐng)響很(h™®Ω‌ěn)大(dà)

富集模式下(xià)，隻要(yào)有(yǒu)符合要(yào)求（分(fēn)選門(±™↓☆mén)裡(lǐ)的(de)細胞）的(de)細胞，那(nà)麽✔δ☆¶不(bù)管是(shì)不(bù)是(shì)同時(φ€≠£shí)還(hái)存在非目标細胞，儀器(qì)都(dōu™")會(huì)将其分(fēn)選出來(lái)。（通(tōng)常可(kě)以用(yòng)于分(←₹§σfēn)選很(hěn)低(dī)比例的(de)細胞，保證得(de↓✘)到(dào)足夠數(shù)量的(de)目标細胞→♠，這(zhè)時(shí)純度會(huì)有(yǒu)所降低(dī)，但(dàn)分(fēn)選順 ♣φ利的(de)話(huà)依然是(shì)能£↑(néng)夠達到(dào)到(dào)90•§π→%，95%甚至97%純的(de)，當然與樣本有(yǒu)關）。

純度模式下(xià)，一(yī)個(gè)液滴中隻有(yǒu)目标細胞且∑π沒有(yǒu)非目标細胞，而且離(lí)這(zhè)個(gè)目的​ε∑(de)細胞前後一(yī)定範圍（可(kě)以設定）沒有®>♥(yǒu)非目标細胞，它才會(huì)被分(fēn★€)選。通(tōng)常都(dōu)是(shì)用(yòng)純度模式。

單細胞模式就(jiù)更嚴格了(le)，目标細胞必須位于液滴中間(ji'<ān)位置，前後液滴沒有(yǒu)其它細胞，才會(huì)被分(fēn)選。≥×♥一(yī)般用(yòng)于多(duō)孔闆單克隆分(fēn)選，長(cháng←•✘)單克隆的(de)。

主要(yào)是(shì)這(zhè)三™∞種模式，還(hái)有(yǒu)一(yī)些•‍λ₹(xiē)介于這(zhè)三種之間(jiān)的(de©γ♣)組合。

液滴震蕩頻(pín)率

就(jiù)是(shì)每秒(miǎo)鐘(zhōng)産生(shēng)多(du↓ ♠ō)少(shǎo)個(gè)液滴。如(rú)70um的(de)噴嘴一(y'♥ī)般能(néng)到(dào)80KHZ左右，就(jiù)是(shì)每秒(miǎo)✘↓>☆鐘(zhōng)8萬個(gè)液滴。顯然，跑樣速•¶度不(bù)能(néng)高(gāo)于這(zhè)個(gè)數(shù)，否則就(jσ§¶☆iù)不(bù)是(shì)一(yī)個(gè)液滴一(¥ε±yī)個(gè)細胞了(le)。當然，低(dī)于這(zhè)個(gè)數(shùק)值的(de)跑樣速度也(yě)不(bù)能(néng)就(jiù)一(yī)定保證一(yī ∞"≈)個(gè)液滴一(yī)個(gè)細胞，因為(wèi)細胞間(jiān)的(de)間(jiā©¶₹n)距是(shì)随機(jī)的(de)，還(hái)會(hu€€ì)粘連，因此有(yǒu)空(kōng)液滴，也(yě)有(yǒu∑λ÷↕)兩三個(gè)細胞一(yī)個(gè)在一(yī)個(gè)液滴中的(de)。另外(wài≈‌)，儀器(qì)一(yī)般會(huì)“看(kàn)”前、中、後三個(gè)φ$≥®液滴，根據你(nǐ)的(de)分(fēn)選模式做(zuò)出分(fēn)選決定。（如≤¶®(rú)，純度模式下(xià)，細胞靠近(jìn)液滴上(shàng)端，且後一(yī)個(g™↓φè)液滴沒有(yǒu)非目标細胞，儀器(qì)會(huì)♦ε≥¶把這(zhè)兩個(gè)液滴都(dōu)分(fēn)選出€≥來(lái)，以保證一(yī)定能(néng)得♦×(de)到(dào)這(zhè)個(gè)細胞。因為(wèi)液滴斷裂時(shí)這(zhè)個(γ ₩gè)位置的(de)細胞也(yě)可(kě)能(néng)位于後一(yī)個¶∞(gè)液滴中）。跑樣太快(kuài)了(♣→•le)，被儀器(qì)丢棄的(de)細胞就(jiù) ±™會(huì)多(duō)，分(fēn)選效率就(jiù)下(xià)來(lá¶ βi)了(le)（但(dàn)分(fēn)選速度仍會(huì)增加，看(kàn)你(n∑σ♥ǐ)的(de)取舍了(le)）。告訴你(∑×"•nǐ)一(yī)個(gè)實用(yòng)的(de)經驗，

一(yī)般情況下(xià)，跑樣速度控制(zhìβ>δ)在震蕩頻(pín)率的(de)1/4-1/3能♠•(néng)較好(hǎo)保證效率

（當然，你(nǐ)一(yī)定要(yào)自(zì)己多(duō)觀察。ππ目标細胞比例太低(dī)，分(fēn)選效率也(yě)會©₹'φ(huì)降低(dī)，這(zhè)時(shí)要(yào)保證≠✘效率就(jiù)要(yào)減速了(le)•∞。不(bù)同儀器(qì)電(diàn)子(≈∞zǐ)系統性能(néng)不(bù)同，同等情況下(xià)效率也(yě)不(bù)相(xiàng£φα©)同，這(zhè)些(xiē)都(dōu)需要(yào)操作(zuò)者觀察積累經驗，根據♥​具體(tǐ)樣本和(hé)實驗目的(de)來(lái)操作(zuò)。♣₽）

分(fēn)選的(de)回收率

就(jiù)是(shì)最終你(nǐ)得(de)到(dào)的(de)目标細胞占樣≠'本中目标細胞的(de)百分(fēn)比。回收率跟分(fēn)選效率不(bù)太一(yī)樣，并不(©§☆bù)是(shì)儀器(qì)顯示分(fēn)選出了(le)多(duō)少(shǎo)個(≈♥↑✔gè)細胞，你(nǐ)就(jiù)得(de)到(♦¶dào)了(le)多(duō)少(shǎo)×♦♦個(gè)細胞，實際得(de)到(dào)的(de)細胞數(shù)量Ω§≈$要(yào)比它少(shǎo)。例如(rú)，細胞如(rú)果死亡嚴重會(huì)讓你(nǐ) &φ損失很(hěn)多(duō)細胞。有(yǒu)的(de)儀器(qì)容易分(fēn)選出±∞↓空(kōng)液滴，實際得(de)到(dào)的(de)細胞數(shù)量偏☆✔離(lí)儀器(qì)顯示的(de)分(fēn​€₩)選細胞數(shù)目更遠(yuǎn)，各種因素加起來(lái♥​)，可(kě)能(néng)你(nǐ)得(de)到(dào)的(de)細胞數(shù)目還(há​​≠∞i)不(bù)到(dào)儀器(qì)計(jì)♣↑←數(shù)的(de)1/3，甚至更低(dī)。

所以細胞活性也(yě)很(hěn)重要(yào)，除非你(n♣πǐ)不(bù)管死活。用(yòng)不(b↓×≤ù)同尺寸的(de)噴準分(fēn)選不(bù)同大(dà)小(x≥™iǎo)的(de)細胞，除了(le)防止堵塞，另一(yī)個(gè)目的(de)就(jiù)∏≥是(shì)提高(gāo)細胞活性。細胞在流式上(shàng)跑樣時(shí)是(♣£shì)會(huì)受到(dào)損傷的(de)（不(bù)要(yào)聽(tīng)廠(chǎng)商∞"✔銷售說(shuō)的(de)分(fēn)選對(duì)細胞沒有↔∑(yǒu)影(yǐng)響。）。有(yǒu)的(de)分(γ®‌≤fēn)選儀就(jiù)優化(huà)了(le)對(duì)±≤δ≠細胞活性的(de)保護，可(kě)以非常好(hǎo)的(de)保證脆§←₩∑弱細胞的(de)存活。（例如(rú)，據我所知(zhī)，脆弱的(de)神經幹細胞都(dōu)能≤₹(néng)有(yǒu)90%的(de)存活，其它條件(jiàn)當然也(yě)要(yào)配合♣↔才行(xíng)，這(zhè)玩(wán)意可(kě)∑ε"是(shì)放(fàng)到(dào)PBS裡(lǐ)就(j↓ §§iù)會(huì)死的(de)。）不(bù&₩)同尺寸的(de)噴嘴對(duì)應的(de)液滴振蕩頻(pí±←ππn)率不(bù)同，能(néng)達到(dào)的(de)分(fēn)選速度有(yǒu)很×≠σ(hěn)大(dà)差異。尺寸越大(dà)，鞘液壓力"♠<越低(dī)，液滴頻(pín)率越低(dī)，最大(dà)分(fēn)選速度就(ji→‍ù)越低(dī)，但(dàn)細胞活性越好(hǎo)。

分(fēn)選速度

分(fēn)選速度也(yě)是(shì)個(gè)重要(yào)的(de)性能₩βφ(néng)指标。了(le)解了(le)液滴頻(pín)率，其實就(j÷€‍♣iù)可(kě)以明(míng)白(bái)，物(wù)理(lǐ)規律都(dōu)一(∏≤yī)樣，不(bù)同儀器(qì)能(néng)達到(dào)✔₩的(de)液滴頻(pín)率也(yě)基本差‌ 不(bù)多(duō)，隻要(yào)不(bù)←‌是(shì)太差，同等情況實際分(fēn)選速度✘↔β不(bù)會(huì)相(xiàng)差很(hěn)大(dà)。（高(g§♣āo)分(fēn)選效率和(hé)回收率的(de)♥€儀器(qì)當然可(kě)以适當提高(gāo)分(fēn)選速度§≥ ↔）。

綜合各方面性能(néng)來(lái)考慮，不(bù)同分(¥&γfēn)選儀差别是(shì)蠻明(míng)顯的(de)。

96孔闆分(fēn)選，不(bù)用(yòng)管細胞大(dà)小(xiǎo)，就(£ jiù)用(yòng)100um或以上(shàng)的  Ω(de)噴嘴吧(ba)，單細胞模式分(fē→  n)選。這(zhè)個(gè)分(fēn)選又(yòu)基本不(bù)要(yào)求速度。

液流穩定性和(hé)落點問(wèn)題，儀器(qì)機(jī)械 >★性能(néng)當然很(hěn)重要(yào®§α★)，這(zhè)個(gè)改變不(bù)了(le)，但(dàn)一(yī)般♠↑"✘都(dōu)是(shì)非常可(kě)靠。儀器(qì)所處環境溫度波動會(huì)有(yǒu)π©λβ影(yǐng)響較長(cháng)時(shí)間(jiān)的(de)實驗。噴嘴是(shì)否有γ®∑♠(yǒu)瑕疵，調節的(de)分(fēn)選液流質量，鞘液罐是(shì)有(yǒu&×♠☆)點否漏氣，過濾器(qì)是(shì)否有(yǒu)氣泡，噴嘴是(shì)否幹淨，分(fēn)選♣φ模式是(shì)否合适這(zhè)幾個(gè)方面可(kě)以考慮。

隻要(yào)各個(gè)地(dì)方都(d ∞¥λōu)沒有(yǒu)問(wèn)題，分(fēn)選儀是(shì)會(hu &ì)非常穩定的(de)！