1. 材料：

(1) TBS（Tris buffered s♣♣ aline）:5mM Tris，150mM Nacl，PH 7.4。

(2) 丙酮：分(fēn)析純

(3) 封閉液：含10%FBS或1%BSA的(de)TBS，FBS種屬與二抗來(lái)源種屬♦ 一(yī)緻。

(4) 一(yī)抗：純化(huà)或生(shēng)物(wù)素化(♣✘•huà)規格。

(5) 二抗：生(shēng)物(wù)素化(huà)。

(6) 顯色劑：抗生(shēng)物(wù)素 €₹的(de)eFluor 605NC（CAT#93-2317）或抗生(shēng)物(wù)素的ε₽♦(de)eFluor 650NC（CAT#9₹§™5-2317）。

(7) 包埋劑：Fluoromount-G（soutλ↕≥<hernBiotech）or Fluoro-Gel（EMS）。₩↔φ£

(8) 濕盒。

2. 方案：

(1) 切片空(kōng)氣幹燥10min。

(2) 浸入丙酮固定10min。

(3) TBS室溫水(shuǐ)化(huà)10min。注意：組織不(bù)能(néng)脫水(shuǐ)，否則不(bù)利于染色。

(4) 室溫封閉1小(xiǎo)時(shí)（100ul/組織），蓋膜✘$∏防止蒸發。注意：PAP筆(bǐ)可(kě)能(néng)會(huì)幹擾eFluor熒光(guān®☆¶∞g)在此不(bù)建議(yì)使用(yòng)。

(5) 用(yòng)鑷子(zǐ)小(xiǎo)心移去(€δ©qù)膜，TBS，慢(màn)速振蕩洗滌3次，每次5min。

(6) 用(yòng)封閉液按照(zhào)說(shuō)明(míng)書(shū©<)稀釋一(yī)抗，加一(yī)抗濕盒中室溫孵育2小(xiβ'"&ǎo)時(shí)。低(dī)豐度的(de)抗原一(yī)般4度孵育12小(xiǎo®✔≠)時(shí)以上(shàng)。

(7) TBS洗3次，方法同上(shàng)。

(8) 按建議(yì)濃度稀釋二抗，室溫孵育1小(x γ✔∑iǎo)時(shí)。

(9) TBS洗3次，方法同上(shàng)。

(10) 按建議(yì)濃度（1:100）稀釋顯影(yǐng)劑：抗生(shēng)φ∞♥±物(wù)素的(de)eFluor 605NC（CAT#93-2317）或抗生(shēng)物←σ(wù)素的(de)eFluor 650NC（CAT#95-2317）。室溫避光(guāng±∞₹)孵育30min。

(11) TBS洗3次，方法同上(shàng)。

(12) 封片，4度避光(guāng)保存或直接觀察拍(pāi)照(zhào)。