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FlowCytomix操作(zuò)常見(jiàn)問(wèn)題
Flow cytomix實驗之前注意事(shì)項
1、混和(hé):
在準備珠子(zǐ)混和(hé)物(wù)的(de)時σ♦♠₩(shí)候,吸出的(de)珠子(zǐ)直接加到(dào)管子(zǐ)的(d©×®£e)底部,以免珠子(zǐ)留在管壁有(yǒu)損失。
混和(hé)标準品或樣品的(de)時(shí)候馬上(shàng)δ↑渦旋珠子(zǐ),在把試管放(fàng)到(dào)流式細胞儀♥♣之前每個(gè)樣品再次渦旋3-5秒(m≥®iǎo),這(zhè)樣可(kě)以更好(hǎo)的(de)在FL3/F§♠L4通(tōng)道(dào)區(qū)分(fēn)珠子(zǐ)的(de)種類。
2、避免雙倍的(de)珠子(zǐ)數(shù)目:
在把珠子(zǐ)的(de)溶液加到(dào)測定闆上(shà✔₽ng)的(de)時(shí)候,把珠子(zǐ®≠)加到(dào)孔中的(de)标準品或樣品的(de)₽₽溶液中,确保不(bù)要(yào)粘附到(dào)孔的(de)邊上(shàng)。∏
3、堵塞過濾闆:
血清或血漿樣品在洗滌過程中可(kě)能(néng)堵塞過¶✔濾闆,如(rú)果發生(shēng)這(zhè)種情況,小(xiǎo)心的(dφ✔¥e)推動通(tōng)過闆孔的(de)針。
同一(yī)樣品Flow cytomix與ELI &SA所得(de)結果不(bù)同
熒光(guāng)報(bào)告系統比ELISA具有(yǒu)更多(duō)的(de)優勢,比₹'©如(rú)動态範圍更大(dà)。由于複雜(zá)性γε和(hé)珠為(wèi)基礎的(de)動力學分(fēn)析,用↕✘γ↑(yòng)ELISA所得(de)的(de)定量結果可(kě)能(néngΩ←≥±)與Flow cytomix 所得(de)的(de)不(bù)同。因此,隻與所得(de→Ω)值正相(xiàng)關,而不(bù)是(shì)比較ELISA和(hé)Flow cytomixγ•的(de)絕對(duì)值。
什(shén)麽是(shì)血清血漿的(de)能(néng)夠檢↔∑測到(dào)的(de)可(kě)靠的(de)最低(dī)值
血清或血漿中的(de)細胞因子(zǐ)經♣常會(huì)低(dī)于常規免疫檢測的(de)水(shuǐ)平,這(zhè)是(✔ shì)由于大(dà)多(duō)數(shù)細胞因子(zǐ)僅僅↔★₽★在自(zì)身(shēn)周圍具有(yǒu)較高(gāo)的(de)免疫活性,±♥而且多(duō)數(shù)情況下(xià),具有(yǒu)半∏♦衰期。因此,可(kě)以合理(lǐ)的(de)假定,僅僅在出現(x iàn)病理(lǐ)變化(huà)的(d♦♥φe)時(shí)候細胞因子(zǐ)才會(☆↑₩huì)在全身(shēn)的(de)血清和(hé)血漿中檢測出較高(gāo)的(✔₩∑←de)數(shù)量。對(duì)于趨化(huà)因子(zǐ)和(hé)生(shēng)長•"φ(cháng)因子(zǐ)可(kě)能(néng)産生(shēng)較高(gāo)的(de ♦©)水(shuǐ)平和(hé)較長(cháng)的(de) &半衰期,因此更容易被檢到(dào)。
标準品注意事(shì)項
1、标準品的(de)準備:在開(kāi)始之前離(lí)心标準品管;
2、标準品的(de)建立:不(bù)要(yào)用(yòng)稀釋 12個(gè)小(xiǎo)時(shí)後的(de)标準品,每個(g↓∑è)實驗都(dōu)要(yào)用(yòng)新鮮的(de)标準品稀 ¥釋品;
3、嚴格按照(zhào)說(shuō)明(mí↔♦§σng)書(shū)操作(zuò),微(wē÷¶i)珠的(de)量不(bù)精确會(huì♦δβ&)影(yǐng)響實驗的(de)敏感性;
4、FlowCytomix是(shì)用(yòng)PE熒光(guāng)标↓¶±記的(de),在加入指示試劑之後所有(yǒu)步驟都(d£≤≥ōu)要(yào)避光(guāng),以獲得(de)最大(dà)熒光∏$✘(guāng)信号。